Multiplex PCR

 

1. Giới thiệu chung về multiplex PCR

Multiplex PCR là một phương pháp sinh học phân tử phổ biến nhằm khuếch đại nhiều trình tự ADN chỉ trong một phản ứng PCR. Trong quá trình phân tích PCR đa mồi, nhiều trình tự sẽ được khuếch đại cùng lúc sử dụng nhiều cặp mồi, tất cả các thành phần được bổ sung vào cùng một ống phản ứng. Như một phương pháp cải tiến của phản ứng PCR thông thường, phương pháp này giúp rút ngắn thời gian thực hiện mà lại không ảnh hưởng tới kết quả thí nghiệm.

Continue Reading

Realtime PCR là gì

Giới thiệu kỹ thuật Realtime PCR

Kỹ thuật realtime PCR là một phương pháp được sử dụng để khuếch đại phân tử ADN in vitro. Tuy nhiên, Realtime PCR khác phản ứng PCR thông thường ở chỗ nó có khả năng phát hiện và định lượng trực tiếp sản phẩm PCR sau mỗi chu kỳ của phản ứng. Phương pháp này đòi hỏi một máy luân nhiệt đặc biệt, có thiết bị đo cường độ phát huỳnh quang từ giếng mẫu và được trang bị chương trình phần mềm cho phép xử lý kết quả, xác định sự biến đổi cường độ huỳnh quang trong từng phản ứng khuếch đại.

Continue Reading

PCR căn bản

Thủ thuật thiết kế primer

Thành phần phản ứng

Enzyme

Các đặc tính enzyme DNA polymerase và định nghĩa đơn vị (unit) của mỗi loại (hãng) sản xuất là khác nhau. Cần kiểm tra thông tin trên các tờ hướng dẫn đi kèm hóa chất.

Lượng enzyme cần thiết là phụ thuộc vào lượng DNA template và kích thước phản ứng PCR. Tuy nhiên, thành phần này chỉ nên hiệu chỉnh khi 1) sản phẩm PCR lớn hơn 5kb; 2) có khả năng hoạt tính của enzyme bị giảm sút do thiếu sót ở khâu bảo quản; 3) đã tiến hành hiệu chỉnh bằng nhiều cách nhưng sản phẩm PCR vẫn thấp hoặc không có gì.

Continue Reading

Tách chiết DNA

Nguyên lý tách chiết DNA

Tách chiết DNA là kỹ thuật cơ bản trong hầu hết các phòng thí nghiệm phân tử, di truyền và sinh học nói chung. Phân tử DNA sau tách chiết cần đảm bảo được số lượng và chất lượng để đáp ứng được các phân tích sau đó. Hiện nay trên thị trường có sẵn rất nhiều bộ kít tách chiết ADN khá tiện dụng. Tuy nhiên, việc nắm rõ nguyên lý tách DNA là quan trọng để giúp chúng ta hiểu rõ hơn về cách thức hoạt động của bộ kít, giải quyết vấn đề khi có lỗi sảy ra.

Continue Reading

Nguyên lý tách plasmid

Việc tách plasmid ra khỏi ADN hệ gen (genome) là rất khó khăn. Tuy nhiên người ta có thể dựa vào sự khác nhau về mặt lý hóa của 2 loại ADN, bao gồm: kích thước, hình dạng, cấu trúc chung. Plasmid là những phân tử ADN nhỏ, mạch vòng, thường ở dạng siêu xoắn, có khả năng tái bản độc lập và có kích thước 0.05 – 10% kích thước của nhiễm sắc thể vi khuẩn. Trên cơ sở đó, người ta tiến hành dùng các hóa chất có tác dụng phá vỡ các liên kết hidro giữa các nucleotide của cả ADN plasmid và ADN genome dẫn đến ADN bị biến tính. Sau đó, tiến hành hồi tính: ADN hệ gen không thể hồi tính do kích thước lớn và dễ dàng loại bỏ bằng ly tâm. Trong khi đó, ADN plasmid ở dạng siêu xoắn (supercoiled configuration) có đặc điểm là dễ dàng phục hồi lại hình dạng ban đầu dưới điều kiện hồi tính.

Continue Reading

Chất xơ phục hồi hệ vi sinh vật đường ruột

Ở người, hội chứng chuyển hóa liên hệ bởi các thay đổi trong thành phần của hệ vi sinh vật đường ruột. Các nhà nghiên cứu đưa ra giả thuyết rằng chế độ ăn nhiều thực phẩm chế biến sẵn và ít ít chất xơ sẽ làm hư hại mối quan hệ cộng sinh giữa hệ vi sinh vật ruột và ruột. Mối liên hệ giữa hệ vi sinh vật và vật chủ bị hư hại dẫn đến việc vi khuẩn đường ruột xâm nhập vào bên trong lớp màng niêm dịch, nơi chúng có thể tương tác với tế bào biểu mô ruột và dẫn đến hiện tượng viêm.

Continue Reading

Sử dụng tế bào gốc chữa trị chấn thương cột sống

Các tế bào gốc có nguồn gốc tủy xương có thể giúp những người bị hư tổn tủy sống hồi phục
Các tế bào gốc có nguồn gốc tủy xương được truyền trực tiếp vào máu có thể cải thiện sự di chuyển và hồi phục ở những con chuột bị tổn thương tủy sống. Các nghiên cứu mô hình chuột gợi ý thử nghiệm trên người vào năm ngoái đã đạt giải thưởng đột phá “ Sakigake” từ các nhà quản lý Nhật bản.

Continue Reading

Công nghệ DNA tái tổ hợp

I. Mở đầu

Vào năm 1973, một nhóm các nhà khoa học đã tạo ra cơ thể sinh vật đầu tiên với các phân tử DNA tái tổ hợp. Theo đó, Cohen (ĐH Stanford, Mỹ) và Boyer (ĐH California, Mỹ) cùng các cộng sự đã đưa được một đoạn DNA từ một plasmid này vào một plasmid khác, tạo ra một plasmid hoàn toàn mới, plasmid tái tổ hợp. Sau đó, họ đưa plasmid tái tổ hợp vào trong các tế bào E. coli. Trong một thời gian ngắn, các tác giả này đã dùng các phương pháp giống nhau để gắn các gen từ hai loại vi khuẩn khác nhau, cũng như để chuyển các gen từ ếch vào vi khuẩn. Các thí nghiệm này đánh dấu một cuộc cách mạng vô cùng quan trọng trong lịch sử nghiên cứu khoa học của nhân loại.

Continue Reading

Điều hòa biểu hiện gen

Như chúng ta đã biết ba quá trình thiết yếu cho sự tồn tại của tế bào, đó là: tái bản, phiên mã và dịch mã. Tuy nhiên, tế bào không thể tồn tại độc lập với môi trường chung quanh. Như vậy, sẽ nảy sinh một vấn đề quan trọng: tế bào sẽ điều chỉnh hoạt động của mình như thế nào cho phù hợp với các biến đổi của môi trường bên ngoài để có thể tồn tại thích ứng? Chương này sẽ đề cập đến các phương thức điều chỉnh đó, tức là các cơ chế điều hòa sự biểu hiện của gen ở các sinh vật prokaryote và eukaryote.

Continue Reading