Gây đột biến ở Lan Erycina pusilla bằng Ethyl Methanesulfonate và Sodium Azide

Tóm lược

Mục đích của nghiên cứu này là phát triển Erycina pusilla bằng phương pháp gây đột biến mới bằng EMS và natri azide, và để xác định phản ứng của PLBs(protocorm like bodies) Erycina pusilla với EMS và natri azide.

Các PLB in vitro của Erycina pusilla đã được tiếp xúc với các phương pháp thử nghiệm EMS khác nhau ở 0, 0,1, 0,2, 0,4 và 0,8% trong 0,5, 1 và 2 giờ và được tiếp xúc với các phương pháp thử nghiệm NaN3 khác nhau ở 0, 0,5, 1, 2 và 4 mM trong 0,5, 1 và 2 giờ. . Tỷ lệ sống, số lượng cây hồi phục và kỹ thuật Phân tích tế bào theo dòng chảy (Flow cytometry), tất cả sẽ được tiến hành sau khi thử nghiệm bằng EMS và NaN3. Một tháng sau khi thử nghiệm bằng EMSNaN3, một số PLB co lại và bắt đầu chuyển sang màu nâu. Kết quả cho thấy các phương pháp thử nghiệm 0,1% EMS trong 1 giờ và 0,5 mM NaN3 trong 0,5 đến 2 giờ có tỷ lệ sống sót cao và số lượng cây pusilla Erycina. Nhìn chung, phương pháp thử nghiệm EMS có hiệu quả hơn trong việc giảm tỷ lệ sống sót và số lần tái sinh thực vật so với phương pháp thử nghiệm NaN3. Nghiên cứu hiện tại chỉ ra rằng sự khuếch tán của EMS và NaN3 vào PLBs Erycina pusilla đã thành công khi được chứng minh bằng việc mất dần khả năng sống sót trong nuôi cấy với việc tăng thời gian tiếp xúc và nồng độ của EMS và NaN3. Nồng độ thấp EMS và Na ít ảnh hưởng đến thiệt hại sinh học và sẽ phù hợp để gây ra đột biến mong muốn ở Erycina pusilla. Tuy nhiên, những thay đổi trong hồ sơ của biểu đồ tế bào theo dòng chảy đã được tìm thấy trong một số cây pusilla Erycina phục hồi được thử nghiệm bằng EMS và NaN3.

Giới thiệu

Công nghệ tạo đột biến là một công cụ mạnh mẽ để phát triển các giống cây lương thực và công nghiệp tốt hơn (Hassan et al., 2010). Nhiều kỹ thuật gây đột biến có sẵn, bao gồm đột biến chèn (insertional mutagenesis), tia X, tia gamma và neutron-nhiệt(fast and thermal neutrons), có thể được phân loại theo tính chất vật lý và tác dụng gây đột biến của chúng (Watanabe et al., 2007). Đột biến hóa học và đột biến vật lý là phương pháp chung để gây đột biến và đã được áp dụng cho nhân giống cây trồng ở nhiều nước trên thế giới.

Đột biến vật lý và hóa học gây ra thiệt hại sinh lý, đột biến gen và nhiễm sắc thể trong vật liệu sinh học ở thế hệ M1 (Bashir et al., 2013). Trong các nghiên cứu nhân giống đột biến, điều quan trọng là xác định liều lượng / nồng độ đột biến thích hợp cho cây trồng có thể được sử dụng để tạo ra sự thay đổi tối đa thông qua điểm đột biến. Hạt nảy mầm, sự tăng trưởng của hạt, khả năng tạo phấn hoa và đột biến nhiễm sắc thể là những tiêu chí thường được sử dụng để nghiên cứu độ nhạy của sóng vô tuyến ở thực vật (Sheikh et al., 2012). Đột biến vật lý đã thành công trong việc tạo ra nhiều giống đột biến Dendrobium ‘Sonia’. .

Trong chiếu xạ Dendrobium ‘Ekapol’ và Dendrobium ‘Sonia’ dẫn đến thay đổi sắc tố và kích thước hoa (Sakinah và Mohd Nazir, 2002). Nhiều biến thể hơn với sự kết hợp hấp dẫn của chiều dài cành, số nụ, màu hoa và hình thức được yêu cầu để tạo ra các giống có giá trị thương mại (Hassan et al., 2010). Ethyl methane sulphonate (EMS), một đột biến hóa học thuộc nhóm alkyl đã được báo cáo là đột biến gen mạnh và hiệu quả nhất, và thường gây ra tần số đột biến gen cao và tần số thấp đối với nhiễm sắc thể ở thực vật (Bashir et al., 2013). Ethyl methanesulfonate (EMS) là một chất gây đột biến hóa học phổ biến và N-methyl-N-nitrosourea (MNU) cũng được sử dụng cho mục đích này. Natri azide (NaN3) là loại gây đột biến ít nguy hiểm và hiệu quả nhất khi được báo cáo gây đột biến ở một số loài cây trồng (Adamu và Aliyu, 2007; Mostafa, 2011). Tính đột biến của natri azide được thể hiện thông qua sự hình thành chất chuyển hóa hữu cơ xâm nhập vào nhân, tương tác với DNA và tạo đột biến điểm trong bộ gen.

Theo Nilan et al. (1977), Natri azide tương đối an toàn để xử lý, rẻ tiền và không gây ung thư so với các chất gây đột biến khác (Bashir et al., 2013). Erycina pusilla từng được biết đến với tên Oncidium pusillum hoặc Psygmorchis pusilla có hình dáng độc đáo đến nỗi nó những bông hoa màu vàng thu nhỏ trên một chiếc lá màu xanh lá cây (Chase et al., 2005). Erycina pusilla là một loại hoa lan có kích thước rất nhỏ, không có củ giả, có thể lưu trữ nước và chất dinh dưỡng, phát triển đơn bào, lá ngang và phát triển theo một hướng chỉ có thể phát triển dài tới 5 cm và rộng 1 cm (Felix và Guerra, 2010).

Loài thực vật nhỏ nhắn trông kỳ lạ và có một bông hoa lớn không cân xứng. Hoa có màu vàng, kích thước dài khoảng 1,5 đến 4 cm và rộng 1 đến 2 cm. Số lượng nhiễm sắc thể của Erycina pusilla là 2n = 12 (Felix và Guerra, 1999), và nó là loài nhỏ nhất được biết đến trong hoa lan. Erycina pusilla là một loài phong lan thu nhỏ, với những bông hoa xinh xắn nở rộ quanh năm. Erycina pusilla có khả năng hình thành một ngành công nghiệp thực vật mới nổi. Tuy nhiên, có một số khía cạnh vẫn cần được cải thiện ở Erycina pusilla, chẳng hạn như hoa màu vàng, cành hoa đơn lẻ, một vài biến thể trong giống, thời kỳ ra hoa. Mục đích của nghiên cứu hiện nay là phát triển biến đổi Erycina pusilla bằng phương pháp gây đột biến EMS và natri azide, và để xác định phản ứng của PLBs Erycina pusilla đối với các phương pháp thử nghiệm bằng EMS và natri azide.

Nguyên liệu và phương pháp

1. Nguyên liệu thực vật

Cây pusilla Erycina được mua từ Công ty Flower Space Orchids, Changhua, Taiwan, Changhua, Đài Loan. Các viên nang hạt giống sau khi tự thụ phấn được thu thập và sử dụng làm vật liệu thí nghiệm.
2. Cảm ứng (PLBs) và tăng sinh

Các viên nang hạt của Erycina pusilla sau khi tự thụ được xử lí vô trùng. Hạt trưởng thành của Erycina pusilla được khử trùng bằng dung dịch NaOCl (1% clo có sẵn) lắc theo đỉnh (shaking by vertex) 15 phút, sau đó rửa từ ba đến năm lần bằng nước cất khử trùng. Các hạt giống được cấy trong các đĩa petri nhựa chứa 1/2 môi trường MS vô trùng (2,2 g / L Murashige và Skoog salts, 30 g / L sucrose, 8 g / L agar, pH 5,7) (Murashige và Skoog, 1962). Các đĩa petri bằng nhựa được nuôi trong buồng tăng trưởng ở 25 độ C với độ sáng dưới 8 giờ/ 16 giờ sáng/tối. . Sau 6 tháng cảm ứng, PLBs hình thành từ cơ thể phôi trong ống nghiệm đã được sử dụng làm nguyên liệu cho phương pháp thử nghiệm EMS và natri azide.

3. Phương pháp thí nghiệm

(1). Cảm ứng đột biến bằng cách xử lý EMS

Một thí nghiệm đã được sử dụng để kiểm tra các chế độ thử nghiệm khác nhau gồm bốn nồng độ EMS bao gồm 0, 0,2, 0,4 và 0,8 và ba thời gian thử nghiệm bao gồm 1/2, 1 và 2 giờ. Dung dịch gốc EMS đã được khử trùng thông qua 0,45 μm millipore vô trùng lọc trong buồng nuôi cấy mô(laminar flow chamber). Dung dịch gốc EMS được pha loãng với nước khử trùng thành dung dịch 0,2%, 0,4% và 0,8% cuối cùng.

15 PLB được ngâm trong 15 ml dung dịch EMS trong bình 125 ml trong 0.5, 1 và 2 giờ và quay 100 vòng / phút. Sau khi xử lý bằng EMS, PLBs được rửa bằng nước khử trùng ba lần và sau đó đặt vào môi trường 1/4 MS của nó, được nuôi cấy ở 25 ± 2 ºC, 35 μmol m-2s-1 PPFD và photoperiod 16 giờ. Các PLB được nuôi cấy cứ sau 1 tháng và duy trì trong 6 tháng. Sau 6 tháng nuôi cấy, các nhà nghiên cứu đã được đổi thành môi trường CN (chứa sucrose 20 g / l, 2,2 g vitamin MS, 1 g / l tryptone, 170 mg/ l Na.H2PO4.H2O, 100 mg / l myo-Inositol, 200 ml nước dừa, 1 g / l than hoạt tính và 8 g / l agar ở pH 5,2). Sau 6 tháng nuôi cấy, cây cải tạo có chiều cao khoảng 2-3 cm với 6-8 lá và 4-8 rễ, được chuyển vào chậu chứa rêu sphagnum và thích nghi trong điều kiện nhà kinh.

(2). Cảm ứng đột biến bằng cách xử lý natri azide

Một thí nghiệm được thiết kế, đã được sử dụng để kiểm tra các chế độ nghiên cứu khác nhau bao gồm 5 nồng độ natri azide bao gồm 0, 0,5, 1, 2 và 4 mM, và ba khoảng thời gian nghiên cứu bao gồm 1/2, 1 và 2 giờ. Dung dịch natri azide (0,1 N) được điều chế bằng cách hòa tan 0,65 natri azide trong phosphate (pH 3) để tăng cường hiệu quả. Dung dịch đệm phosphate bao gồm 79,45 ml axit citric 0,1 M (2,1 g / 100 ml) và 0,2 M 20,55 ml Na2HPO4 (3,5 g / 100 ml). Dung dịch gốc natri azide đã được khử trùng thông qua quá trình lọc millipore vô trùng 0,45 inm trong buồng cấy. Dung dịch gốc natri azide được pha loãng với nước khử trùng đến dung dịch 0,5, 1, 2 và 4 mM.
15 PLB đã được ngâm trong 15 ml dung dịch natri azide trong bình 125 ml trong 0.5, 1 và 2 giờ và quay 100 vòng / phút. Sau khi xử lý bằng natri azide, PLBs được rửa và nuôi cấy trong cùng điều kiện như đã đề cập ở trên.

4. Phân tích tế bào học dòng chảy

Lấy khoảng 0,5 cm2 mô lá non từ mỗi mẫu sau đó chiết tách nhân và nhuộm màu bằng thiết bị reagent kit Partec CyStain UV precise P (Paetec, Münster, Germany). Để tách nhân tế bào, dung dịch đệm HR-A (400 μl) chứa 1% w / v PVP đã được thêm vào mô lá sau đó được cắt bằng lưỡi dao cạo. Các chất đồng chất (homogenate) được ủ trong một phút và sau đó được lọc qua bộ lọc 30 -m Cell-Trics để loại bỏ các tế bào bị vỡ. Dung dịch nhuộm HR-B (1.6 ml) đã được thêm vào huyền phù hạt nhân, và mẫu được phân tích ngay lập tức bằng cách sử dụng máy đo lưu lượng dòng chảy(flow cytometer) PA-I (Partec) được trang bị đèn hồ quang thủy ngân áp suất cao 100 W. Mẫu lá từ ba cây Erycina pusilla chưa được xử lý đã được sử dụng làm đối chứng

5. Phân tích thống kê

Việc so sánh dữ liệu định lượng giữa hai nhóm biến được thực hiện bằng phiên bản Thống kê 8 và tỷ lệ biến đổi hình thái được phân tích bằng ANOVA (Analysis Of Variance) và so sanh nhân giữa các cấp độ của từng yếu tố và giữa các tổ hợp được phân tích bằng thử nghiệm Duncan. Dữ liệu tỷ lệ phần trăm được chuyển đổi qua arcsine trước khi phân tích.

Các kết quả

1. Tác dụng của EMS đối với PLBs Erycina pusilla

(1). Tác dụng của EMS đối với tái sinh chồi của PLBs Erycina pusilla
Tỷ lệ sống của PLBs Erycina pusilla sau khi được thử nghiệm với các nồng độ khác nhau của EMS trong các thời điểm khác nhau và canh tác trong 6 tháng được thể hiện trong Hình 1. Tỷ lệ phần trăm tỷ lệ sống sót của PLBs được xử lý bằng 0,1% EMS cao hơn so với các tỷ lệ 0,2, 0,4 và 0,8% EMS (Hình 1A). Kết quả chỉ ra rằng tỷ lệ sống sót giảm khi tăng nồng độ EMS. Tương tự như vậy, tỷ lệ sống sót giảm khi thời gian nuôi cấy (ủ hóa chất) của EMS tăng (Hình 1 B). Kết quả kết hợp nồng độ và thời gian ủ bệnh trong thử nghiệm EMS được thể hiện trong hình 1C. Tỷ lệ sống cao nhất đạt được ở 0,1% EMS được thử nghiệm trong 1 giờ. Tỷ lệ sống thấp nhất được tìm thấy ở 0,8% EMS được thử nghiệm trong 2 giờ. (Hình 1C).

(2). Đặc điểm hình thái của cây được xử lý EMS
Các đặc điểm hình thái của cây gây đột biến được so sánh với các đặc điểm của cây đối chứng tương ứng. Những thay đổi về hình thái thực vật đã được quan sát thấy ở một số cây được xử lý EMS (Hình 1 D). Những thay đổi về hình thái hoa cũng được quan sát thấy ở cây pusilla Erycina cải tạo được xử lý bằng 0,1% EMS trong 1 giờ (Hình 2). Do đó, số lượng cây tái tạo từ PLB Erycina pusilla sau khi xử lý EMS là cao nhất trong 0,1% EMS trong 1 giờ (108 cây hồi phục). Rõ ràng, EMS làm chết PLBs Erycina pusilla, đặc biệt là trong nồng độ 0,4% và 0,8% (Dữ liệu không được hiển thị).
(3). Phân tích cây được xử lý bằng phương pháp tế bào học dòng chảy (flow cytometry)
Các nỗ lực đã được thực hiện để sàng lọc các đột biến Erycina ở giai đoạn đầu ở cấp độ DNA với sự trợ giúp của flow cytometry. Biểu đồ tế bào học dòng chảy của 11 cây Erycina được tái tạo bằng phương pháp gây đột biến EMS đã được kiểm tra. Một số đỉnh duy nhất trong 11 đột biến giả định so với các đỉnh của cây đối chứng tương ứng đã được quan sát (Hình 3). Liệu những khác biệt này có thể phản ánh sự thay đổi DNA cần được xác nhận thêm.

2. Tác dụng của natri azide đối với PLBs Erycina pusilla

(1). Tác dụng của natri azide đối với sự tái sinh chồi của PLBs Erycina pusilla
Tỷ lệ sống của PLBs Erycina pusilla sau khi được xử lý với các nồng độ natri azide khác nhau trong thời gian ủ khác nhau và sau đó được canh tác trong 6 tháng được thể hiện trong Hình 4. Tỷ lệ sống sót của PLBs được xử lí bằng 0,5 mM natri azide cao hơn những phương pháp thử nghiệm natri azide 1, 2 và 4 mM (Hình 4A).

Một mũi tên màu đỏ chỉ ra đỉnh khác nhau trong các đột biến giả định từ các cây không được điều trị. Trên trục X, số kênh của các phân tích flow cytometric được vẽ, trục Y biểu thị số tín hiệu huỳnh quang được ghi trên mỗi kênh.

A: không được điều trị (CK); B ~ G: được xử lý với 0,2% EMS trong 1 giờ; H ~ L: được điều trị bằng 0,1% EMS trong 1 giờ.
Kết quả chỉ ra rằng tỷ lệ sống sót giảm khi tăng nồng độ natri azide. Điều thú vị là tỷ lệ sống sót giảm không tương ứng với việc tăng thời gian ủ natri azide (Hình 4B). Sự kết hợp giữa nồng độ và thời gian ủ để xử lý natri azide được thể hiện trong hình. 4. Tất cả các PLB đều sống sót trong 0,5 mM natri azide được xử lý trong 0,5, 1 hoặc 2 giờ, và. tỷ lệ sống thấp nhất được tìm thấy ở 4 mM natri azide được xử lý trong 1 giờ (Hình 4).

(2). Đặc điểm hình thái của cây được xử lý natri azide và phân tích cây được xử lý bằng natri azide bằng phương pháp tế bào học dòng chảy

Số lượng cây được tái tạo từ PLB Erycina pusilla sau khi xử lý natri azide là cao nhất trong các phương pháp điều trị natri azide 0,5 mM (Dữ liệu không được hiển thị.). Ngoài ra, natri azide ít độc tính hơn đối với PLBs Erycina pusilla so với phương pháp điều trị EMS. Các đặc điểm hình thái của cây đột biến được xử lý bằng natri azide được so sánh với các cây đối chứng tương ứng. Các đặc điểm sinh dưỡng của thực vật gây đột biến so với các đặc điểm của cây đối chứng tương ứng được thể hiện ở góc trên bên phải của Hình 5. Những thay đổi về hình dạng thực vật đã được quan sát thấy ở một số cây xử lý bằng natri azide (Hình 5 B-K) so với những thay đổi của cây đối chứng tương ứng (Hình 5A). Các nỗ lực đã được thực hiện để sàng lọc các Erycina pusilla đột biến giả định ở giai đoạn đầu ở cấp độ DNA với sự trợ giúp của kỹ thuật tế bào dòng chảy. Biểu đồ tế bào học dòng chảy của 10 cây pusilla Erycina giả định bằng phương pháp gây đột biến natri azide đã được kiểm tra. Một số đỉnh độc đáo đã được phát hiện trong 10 đột biến giả định so với các đột biến của cây đối chứng tương ứng (Hình 5A). Liệu những khác biệt này có thể phản ánh sự thay đổi DNA hay cần được xác nhận thêm.

Thảo luận

Nhiều nghiên cứu đã báo cáo tác động bất lợi của đột biến vật lý và hóa học lên các thông số sinh học khác nhau (Bashir et al., 2013). Ngành công nghiệp hoa lan phát triển mạnh về sự mới lạ và các đặc điểm như màu hoa, hình dạng hoa, kích thước hoa, thời gian trưởng thành và mùi hương là những dấu hiệu mới lạ chính bởi vì chúng là yếu tố quyết định chính trong sự lựa chọn của người tiêu dùng về cây cảnh.

Đối với Erycina pusilla, một loài được đánh giá cao nhất vì cây nhỏ và hoa nhỏ. Nhân giống đột biến, dẫn đến kiểu hình thay đổi sau khi thay đổi di truyền vĩnh viễn trong cấu trúc của vật liệu di truyền, hiện được sử dụng như một phương pháp tiết kiệm thời gian và rẻ tiền cho sự phát triển của cây và cải thiện hoa (Rego và Faria, 2001; Fang, 2011).

Nghiên cứu hiện tại khám phá khả năng áp dụng nhân giống đột biến trong việc tạo ra các giống pusilla Erycina mới. Đột biến hóa học đã được áp dụng cho nhiều loài thực vật để gây đột biến. Các quan sát về tỷ lệ sống sót của Erycina pusilla trong nghiên cứu hiện tại cho thấy rằng EMS vượt trội hơn NaN3 trong việc giảm tỷ lệ sống của cây pusilla Erycina. Rodrigo và cộng sự. (2004) thu được các đột biến hoa cúc với nhiều màu cánh hoa khác nhau, ví dụ như màu cá hồi hồng, hồng nhạt, đồng, trắng, vàng và màu cá hồi bằng phương pháp xử lý EMS.

Nghiên cứu hiện tại cho thấy rằng việc khuếch tán EMS vào PLBs Erycina pusilla đã thành công khi được chứng minh bằng việc mất dần khả năng sống sót với việc tăng thời gian tiếp xúc và nồng độ của EMS.

Do đó, nồng độ EMS được sử dụng trong nghiên cứu này có hiệu quả trong việc tạo ra đột biến ở Erycina pusilla và nồng độ nằm trong khoảng từ 0,5% đến 2% tương tự như gây đột biến in vitro cho các cây khác (Latado et al., 2004 ; Luân và cộng sự, 2007; Fang, 2011). Natri azide được tìm thấy như một tác nhân gây đột biến hiệu quả, có ích trong việc cải thiện đặc tính hoa của các loài cây cảnh, ví dụ như cây morning glory (Bhate, 2001), hoa đồng tiền (Chang và Chu, 2005) và Spathoglostis plicata Blume (Roy và Biswas, 2005).

Natri azide đã được tìm thấy để gây ra quang sai nhiễm sắc thể, với sự bất thường chiếm ưu thế nhất là chuyển vị, nhiễm sắc thể trễ, hình thành cầu và nhiễm sắc thể dính, bao gồm giảm chỉ số phân bào theo cách phụ thuộc vào liều lượng (translocations, lagging chromosome, bridge formation and sticky chromosome, including decreased the mitotic index in a dose-dependent manner) (Ragunathan và Panneerselvam, 2007; Srivastava và Kapoor, 2008).

Türkan và cộng sự, (2006) đã báo cáo rằng NaN3 có xu hương xâm nhập vào tế bào thực vật hơn là phá hủy hoặc ảnh hưởng đến sự tăng trưởng của chúng gây ra bởi chức năng trao đổi chất bị cản trở dẫn đến giảm hoạt động của tế bào và NaN3 cũng cản trở quá trình sửa chữa quá trình DNA bị hư hỏng do đó tích lũy đột biến và sai sót trong hình thành hoa với tần suất cao. Theo Tejakhod (2009), kết quả được trình bày ở Kalanchoe đã phát hiện ra rằng các đột biến tăng trưởng bất thường của ‘Sunrise’ có thể ra hoa, và đặc tính hoa của những đột biến này khác với kiểu gen ban đầu của nó và thay đổi một chút màu (đỏ xỉn).

Đột biến ra hoa sớm, từ kết quả của nghiên cứu này đã được phát hiện ra rằng hoa nở sớm và nhiều gai hoa hơn trên mỗi cây khi được xử lý bằng nồng độ thấp của EMS hoặc NaN3. Mặc dù các xét nghiệm tế bào học dòng chảy liên quan đến việc đo huỳnh quang DNA để xác định các giai đoạn của chu kỳ tế bào, quá trình tự chết, thay đổi gen, quang sai nhiễm sắc thể, phân cực, trùng lặp tán thành, kiểm tra tăng sinh và thời gian nhân đôi (apoptosis, gene transfections, chromosomal aberrations, polarity, endoreduplication, proliferation checkpoints, and doubling times) phân tích tế bào học dòng chảy đã được sử dụng trong nghiên cứu về tổn thương DNA do EMS gây ra (Wagner et al., 2003) và phân lập các đột biến gây ra bởi EMS (Doan và Obbard, 2012). Phân tích biểu đồ tế bào học dòng chảy của cây pusilla Erycina tái tạo cho thấy rằng một số đỉnh độc đáo đã được phát hiện ở các đột biến giả định so với các cây đối chứng tương ứng. Liệu những khác biệt này có thể phản ánh sự thay đổi DNA hay cần được xác nhận thêm.

Dựa trên kết quả nghiên cứu của, chúng tôi đề xuất xử lý 0,1% EMS trong 1 giờ và 0,5 mM NaN3 trong 0,5 đến 2 giờ, có thể được áp dụng cho thao tác gây đột biến in vitro của pusilla Erycina để thu được các giống cây trồng đột biến.

Các quan sát về các thông số sinh học trong nghiên cứu hiện tại cho thấy rằng EMS vượt trội hơn NaN3 trong việc giảm tỷ lệ sống và cây tái sinh. Nhìn chung, việc giảm tỷ lệ sống sót và cây con tái sinh ở nồng độ cao hơn, điều này cho thấy độ nhạy cảm của Erycina pusilla cao hơn do sự xuất hiện của các rối loạn gen, nhiễm sắc thể và sinh lý ở các nồng độ này. Những phát hiện trên cho thấy sự vượt trội chung của EMS so với NaN3 và cung cấp hướng dẫn lựa chọn phương pháp điều trị đột biến phù hợp để tạo ra các đột biến mong muốn ở Erycina pusilla.

Thảm khảo
1. Môi trường MS Vitamins
2. Ethyl Methanesulfonate
3. Sodium Azide

Facebook Comments

Leave a Reply

Your email address will not be published. Required fields are marked *