NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ HỢP CHẤT HỮU CƠ LÊN QUÁ TRÌNH SINH TRƯỞNG VÀ PHÁT TRIỂN CÂY LAN HÀI HỒNG (Paphiopedilum delenatii) IN VITRO

He stood there for a long time. Tami Joan and John desperately retreated until they reached the other side of the door, holding two sweaty bodies tightly together. The drivers hand bent into the shape of a cup, blocking the lights shone on the street light, looked at them more carefully. 1Z0-062 test Suddenly, a loud noise echoed in the air. Tameron could not help but constricted a while, and John Prepexamwell made a short, screaming scream. Behind the driver, the air Prepexamwell in the distance was filled with bright red and blue flame stripes Prepexamwell instantly. Then again is a few roar and scream. The driver turns and looks up, just to see a huge, orange-red cobweb over the ADM-201 Exam Preparation Material city. It was a fireworks, and Tamie remembered the news read in the newspaper. It 300-075 Exam Dumps Questions is a gift from the host and the Secretary-General of the 1Z0-062 test United Nations to the delegates attending the conference and welcomes them to this great city on Earth. The driver turned toward the taxi again. Pat soon, he opened the door Prepexamwell lock, slowly opened the door. 2 As usual, the informant did not leave a name. Therefore, there is no other way to pour back into the past to understand what the reporter said is a piece of open space. The headquarters radio said He said it was on the 37th Street near Eleventh Street. Those at the Notification Center never figured out where the exact location of Learnguidepdf the murder was. Although it is 300-075 Exam Dumps Questions nine oclock in the morning, it has made people sweat more than hot. Emilia ADM-201 Exam Preparation Material Shakes lay aside a tall grass thatch. She is conducting a search of light – a jargon of crime Learnguidepdf scene investigators – searching for suspicious objects with an S-shaped route. Nothing at all She looked down Learnguidepdf at the intercom on the dark blue uniform shirt. Patrolman 5885 calls Learnguidepdf headquarters without 300-075 Exam Dumps Questions any notice. Do you have any further news 1Z0-062 test The dispatcher replied in Prepexamwell Prepexamwell a bumpy noise 5885, there is Learnguidepdf no more information about the scene of the crime at Learnguidepdf the moment, but one thing The informant said he hoped the victim was dead. 1Z0-062 test Please say it Testprepwell again, headquarters. The complainant said he hoped the victim was already dead. 300-075 Exam Dumps Questions He said it would be best if so. Finished. Hopefully the 1Z0-062 test victim Testprepwell Dead Shakes struggled across a 1Z0-062 test Testprepwell broken barbed wire and began Learnguidepdf searching for another piece of open space. Still not found. She wants to leave. Just call 10-90, report that without any Testprepwell discovery, you can return to the Si 300-075 Exam Dumps Questions Si 1Z0-062 test area, it is her daily 1Z0-062 test patrol area. Her knees 1Z0-062 test Testprepwell hurt and she felt as if she had been roasted on a terrible August day. She just wanted to slip to the Port Authority and get stuck with the Little Furrier there and come back to a large can of Arizona iced tea. Then, ADM-201 Exam Preparation Material at eleven thirty – just two hours now – she was able to clear the drawers in Prepexamwell the south section of Midtown and go to the lower town for training. But she finally did not do this. Prepexamwell 300-075 Exam Dumps Questions She can not leave this briefing without ADM-201 Exam Preparation Material answering the phone call. As she continued to move on, she walked along the hot sidewalk through the path between the two abandoned apartments and into another covered, planted area. She slid her slender forefinger down into Prepexamwell her flat-top hat and scratched it with irresistible restraints through layers of long, red hair on Testprepwell her head. In order ADM-201 Exam Preparation Material to scratch more scalp, she simply faded her cap side, while crazy scratch. Sweat streaming down ADM-201 Exam Preparation Material her forehead, itchy, so she fiercely blew Learnguidepdf a few brows.

This place is really messy. Lyme Prepexamwell does not like the mess when cleaning the room. He does not like the kind of chaos and roar, can not stand the harsh vacuum cleaner – he found himself particularly annoyed that stuff. He was satisfied with it, satisfied with what it is now. This room, which he calls the office, is located on the second floor of this gothic, Upper West Side apartment overlooking the Central Park. The room was large, twenty by twenty feet square, but almost Learnguidepdf every inch of 300-075 Exam Dumps Questions space was full of things. Sometimes he closes his eyes and plays a game trying to discern the scent of different objects in the room thousands of books ADM-201 Exam Preparation Material and magazines, piles of copy paper, hot TV 300-075 Exam Dumps Questions transistors, dusty light bulbs, Bulletin Prepexamwell boards made of ADM-201 Exam Preparation Material cork, ADM-201 Exam Preparation Material as well as different upholstery materials such as vinyl, hydrogen peroxide and latex. He can distinguish three different brands of Scotch whiskey. 1Z0-062 test And pest guano Prepexamwell taste. I do not want to see him and tell him Im very busy. Theres another Prepexamwell young police officer, Ernie Banks, Testprepwell who is the same name as a professional baseball player, right You really should ADM-201 Exam Preparation Material have me clean the room. Every time you wait until someone Prepexamwell visits you, ADM-201 Exam Preparation Material Learnguidepdf ADM-201 Exam Preparation Material you will find out how dirty it is here. Visiting God, the 1Z0-062 test word sounds really old, at least in Victorian terms. Far too far .– So to say, there will be a bad ceremony Dirty What Thomas said is room, but Lyme thinks he also includes himself as an employer. Lymes hair Testprepwell is dark and dense, 1Z0-062 test like a twenty-year-old – though he is twice as old. However, they are entangled in a muddle-headdresses, grooming needs to be trimmed. Black beard on his 300-075 Exam Dumps Questions face has not Prepexamwell scratched three days, 1Z0-062 test looks dirty. He often woke up from his sleep because of 1Z0-062 test itchy ears, indicating that the hair there should be repaired. Lymes nails are long, fingernails and 300-075 Exam Dumps Questions Testprepwell toenails are the same the ugly scary pajamas on his body have been worn continuously for Testprepwell a week without a change. His Prepexamwell eyes were ADM-201 Exam Preparation Material slender, his eyes dark brown, and his face looked rather pretty – I do not know if it was a big deal or something else, and Blaine told Testprepwell him more than once. They want to talk Testprepwell ADM-201 Exam Preparation Material 1Z0-062 test to you, continued Thomas. They said it was very important. Learnguidepdf Well, let them know. You have not seen Leon for nearly a year. ADM-201 Exam Preparation Material Why See Learnguidepdf him now Did you scare the bird If you scared the bird, 300-075 Exam Dumps Questions beware I was in a hurry with you. Its very important, Lincoln. Very important, I remember what you just said. He had called Learnguidepdf Testprepwell earlier, I had a nap, 300-075 Exam Dumps Questions and you were out again. You woke up until six in the morning. No, he paused. Yes, I woke up very ADM-201 Exam Preparation Material 1Z0-062 test early, but Learnguidepdf then I fell asleep again and slept well. Did you check your message Thomas said There was no talk Testprepwell of him. He said he would It was around 10 oclock. Its just past Testprepwell eleven, and maybe hes temporarily called out of the emergency 300-075 Exam Dumps Questions room, for a while. What do you want to say Did you just call . Maybe he wants 300-075 Exam Dumps Questions to call in, and you just take up the line. I Testprepwell just What did I say Lyme asked, See 300-075 Exam Dumps Questions youre angry, Im not saying you can not call. You Of course its Learnguidepdf always possible, I just said Learnguidepdf he might make a phone call, and you just take the line. No, you mean, 300-075 Exam Dumps Questions this morning, fucking everything is not pleasing to the eye. You know, theres one thing called call waiting, you can pick up two calls at a time.We should have applied for one.My old friend Leon wants to do.His professional baseball player friend wants Ask them. Ask me now.

Bổ sung các hợp chất hữu cơ vào môi trường nuôi cấy in vitro thường được thực hiện với mục đích thúc đẩy quá trình trao đổi chất của một số cây sinh trưởng chậm. Trong nghiên cứu này, chúng tôi khảo sát ảnh hưởng của ba nhóm hợp chất hữu cơ khác nhau: (i) nhóm chuối, khoai tây, nước dừa; (ii) nhóm peptone, triptone, bột nấm men và (iii) nhóm tảo spirulina lên quá trình sinh trưởng và phát triển của lan hài hồng (Paphiopedilum delenatii) in vitro.

Kết quả cho thấy, cả ba nhóm hợp chất hữu cơ đều có tác dụng làm gia tăng số lượng chồi, đặc biệt tảo spirulina không những kích thích quá trình tạo chồi mà còn làm gia tăng tỷ lệ sống của mẫu cấy lan hài hồng in vitro. Trong nhóm chuối, khoai tây và nước dừa thì chuối có tác động mạnh nhất lên quá trình tạo chồi và số chồi đạt cao nhất ở nồng độ 20 g/l với 3,8 chồi/mẫu cấy. Đối với nhóm peptone, triptone và bột nấm men, bột nấm men có tác động mạnh nhất lên quá trình tạo chồi và số chồi đạt cao nhất (3,9 chồi/mẫu cấy) ở nồng độ 1 g/l bột nấm men. Tỷ lệ sống của chồi đạt 100% khi bổ sung bột tảo spirulina và số chồi đạt cao nhất là 4,0 chồi/mẫu cấy ở nồng độ 50 mg/l.
Từ khóa: Paphiopedilum delenatii, bột nấm men, lan hài, tảo spirulina.

MỞ ĐẦU

Chi Lan hài (Paphiopedilum) gồm nhiều loài lan quí hiếm, được tổ chức CITETS công nhận và bảo vệ [19]. Những loài lan thuộc chi này đang dần bị tuyệt chủng vì sự khai thác quá mức của con người. Đặc thù riêng của chi này là cây sinh trưởng chậm, tỷ lệ nảy mầm của hạt trong tự nhiên rất thấp. Hiện nay, việc nghiên cứu nhân giống lan hài rất được chú trọng nhằm mục đích thương mại và bảo tồn nguồn gen thực vật quí hiếm. Một số công trình nghiên cứu nhân giống vô tính lan hài đã được công bố như: nhân chồi từ chồi đơn [10, 12], nuôi cấy đốt thân được kéo dài bằng đèn LED đỏ [6], gây tổn thương chồi và nuôi cấy trên môi trường lỏng [7], nẩy mầm cộng sinh hạt in vitro [14, 16] hoặc phương pháp tái sinh cây từ những cơ quan khác nhau như từ hạt [4, 13], từ mô sẹo [20], từ PLBs [14], từ lá [18], từ nụ hoa [19]. Kết quả của các nghiên cứu trên cho hệ số nhân chồi từ 1-5 chồi/mẫu cấy và tỷ lệ tái sinh cây là 50-75%. Những kết quả này đã cho thấy, có những thành công đáng kể trong nhân giống vô tính lan hài, vì đây là những loài rất khó duy trì và bảo quản trong điều kiện in vitro [18]. Tuy nhiên, không phải tất cả các nghiên cứu này đều có thể ứng dụng rộng rãi cho vi nhân giống thương mại. Sự bổ sung các hợp chất hữu cơ vào môi trường nuôi cấy in vitro nhằm thúc đẩy quá trình sinh trưởng và phát triển của cây, đặc biệt là những cây sinh trưởng chậm và khó nhân giống như lan hài đã được nhiều tác giả quan tâm nghiên cứu và cho kết quả rất khả quan. Các nghiên cứu của Pierik et al. (1988) [13], Li et al. (2001) [10], Chyuam et al. (2010) [2], Songjun et al. (2012, 2013) [16, 17] đều cho thấy, khi bổ sung các hợp chất hữu cơ vào môi trường nuôi cấy, tỷ lệ tái sinh cây, hệ số nhân chồi của một số loài lan hài cao hơn hẳn môi trường không bổ sung các chất này. Các hợp chất hữu cơ được dùng phổ biến trong nuôi cấy in vitro như nước dừa, dịch chiết chuối, cà rốt, khoai tây, peptone và triptone, đây là những nhân tố đóng vai trò không kém phần quan trọng trong quá trình nhân giống in vitro. Ngày càng nhiều các hợp chất hữu cơ khác nhau được phát hiện và bổ sung vào môi trường nuôi cấy in vitro như mầm ngô, mầm đậu, dịch chiết cà chua, để nâng cao hiệu quả nhân giống. Hiện nay, có một loại hợp chất hữu cơ mới có nguồn gốc từ thực vật, đó là bột tảo spirulina, trong tảo spirulina có chứa các nhóm chất cần thiết cho sự sinh trưởng và phát triển của cây như các vitamin, các amino acid, các chất khoáng đa lượng, vi lượng [1, 3, 5, 8, 11]. Cho đến nay, chưa có công trình nào công bố về ảnh hưởng của tảo spirulina lên quá trình nhân giống in vitro. Nghiên cứu này nhằm mục đích xác định ảnh hưởng của tảo spirulina, một số loại hợp chất hữu cơ và nồng độ sử dụng thích hợp cho quá trình sinh trưởng và phát triển của lan hài hồng (Paphiopedilum delenatii) nuôi cấy in vitro để tạo ra hệ số nhân giống cao trong thời gian ngắn.

VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

Chồi lan hài hồng (Paphiopedilum delenatii) in vitro gieo hạt 6 tháng tuổi có chiều cao 10-12 mm và có 3-4 lá, do phòng Công nghệ Sinh học Thực vật, Khoa Nông Lâm, Trường Đại học Đà Lạt cung cấp.

Chuối, nước dừa và khoai tây; peptone, triptone, bột nấm men (Duchefa, Hà Lan) và tảo spirulina dạng bột (Earthrise, Hoa Kỳ) được sử dụng.

Khảo sát ảnh hưởng của chuối, khoai tây, nước dừa lên quá trình sinh trưởng và phát triển của chồi lan hài hồng nuôi cấy in vitro

Tất cả các chồi dùng làm thí nghiệm để khảo sát ảnh hưởng của các hợp chất hữu cơ được gây tổn thương trước khi cấy. Dùng dao cấy cắt các chồi có kích thước đồng đều nhau, đặt chồi trên đĩa và dùng kim nhọn (Æ=0,3 mm) gây tổn thương vào vị trí nách lá và đặt vào môi trường nuôi cấy [7]. Môi trường nuôi cấy cơ bản là môi trường MS có bổ sung 0,5 mg/l TDZ, 8 g/l agar, 20 g/l đường [7]. Các hợp chất hữu cơ được bổ sung ở các nồng độ như sau: chuối: 10 g/l, 20 g/l và 30 g/l; khoai tây: 10 g/l, 20 g/l và 30 g/l; nước dừa: 100 ml/l, 200 ml/l và 300 ml/l.
Khảo sát ảnh hưởng của peptone, triptone, bột nấm men lên quá trình sinh trưởng và phát triển của chồi lan hài hồng nuôi cấy in vitro

Các chồi lan hài cũng được làm tổn thương và môi trường nuôi cấy cơ bản cũng tương tự như thí nghiệm trên. Peptone, triptone và bột nấm men được bổ sung lần lượt ở các nồng độ
1 g/l, 2 g/l và 3 g/l.

Khảo sát ảnh hưởng của tảo spirulina lên quá trình sinh trưởng và phát triển của chồi lan hài hồng nuôi cấy in vitro

Các chồi cũng được làm tổn thương và môi trường nuôi cấy cơ bản cũng tương tự như thí nghiệm trên. Tảo spirulina được bổ sung ở các nồng độ 10 mg/l, 30 mg/l, 50 mg/l và 70 mg/l.
Môi trường nuôi cấy được chuẩn pH về mức 5,2 (dùng NaOH và HCl 1N) trước khi đem hấp vô trùng bằng autoclave ở điều kiện 1atm, 121oC trong vòng 30 phút.

Điều kiện phòng nuôi cấy là nhiệt độ 25±2oC, thời gian chiếu sáng 16 giờ/ngày, cường độ ánh sáng 50 µmol m-2s-1. Sau 3 tháng, các mẫu cấy được lấy số liệu.

Chỉ tiêu theo dõi số lượng lá, số lượng chồi, chiều cao chồi và tỷ lệ sống của mẫu cấy.
Thí nghiệm được bố trí theo kiểu khối hoàn toàn ngẫu nhiên và được lặp lại ba lần, số liệu được xử lý bằng phần mềm SPSS phiên bản 20.

KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

Ảnh hưởng của chuối, khoai tây, nước dừa lên quá trình sinh trưởng và phát triển của chồi lan hài hồng nuôi cấy in vitro

Kết quả ở bảng 1 và hình 1A cho thấy, các chất bổ sung khác nhau (chuối, khoai tây và nước dừa) có ảnh hưởng khác nhau đến số lá, số chồi, chiều cao chồi và tỷ lệ sống của chồi lan hài hồng nuôi cấy in vitro. Trong cùng một loại chất nồng độ khác nhau cũng có ảnh hưởng khác nhau đến các chỉ tiêu trên.

Đối với các công thức có bổ sung chuối, khi tăng nồng độ từ 10 đến 20 g/l số lá, số chồi, chiều cao chồi và tỷ lệ sống tăng dần nhưng khi tăng nồng độ lên trên 20 g/l, các chỉ tiêu trên giảm. Khi bổ sung khoai tây ở các nồng độ 10, 20 và 30 g/l, hầu như không có tác dụng đối với quá trình tạo chồi, tạo lá và gia tăng chiều cao của chồi nhưng làm tăng tỷ lệ sống của mẫu cấy. Trong các nồng độ nước dừa được khảo sát, nồng độ 200 ml/l, thích hợp nhất cho sự tạo chồi, tạo lá và tăng trưởng chiều cao của chồi. Khi tăng nồng độ nước dừa lên trên 200 ml/l, quá trình tạo chồi bị hạn chế. Trong nghiên cứu này, số lượng chồi đạt cao nhất (3,8 chồi/mẫu cấy) ở công thức có bổ sung 20 g/l chuối, kết quả này cũng tương tự với kết quả nghiên cứu trước đây của Huang et al. (2001) [10]. Từ những kết quả trên, có thể thấy, các chất bổ sung như chuối, khoai tây, nước dừa có khả năng kích thích quá trình sinh trưởng và khả năng tạo chồi của lan hài hồng nuôi cấy in vitro.
Điều này được giải thích bởi trong các dịch chiết này có chứa các chất có lợi cho sự sinh trưởng phát triển của cây như các amino acid, các loại vitamin, đường và các chất kích thích sinh trưởng (nhóm cytokinin) [9], cũng như các chất khoáng vô cơ như photpho, magiê, kali và natri [15].

Hình 1. Sự sinh trưởng và phát triển của cây lan hài hồng nuôi cấy in vitro trên môi trường có bổ sung các hợp chất hữu cơ khác nhau
A. Môi trường bổ sung chuối, khoai tây, nước dừa ở các nồng độ khác nhau; B. Môi trường bổ sung petone, triptone, bột nấm men ở các nồng độ khác nhau; C. Môi trường bổ sung tảo spirulina ở các nồng độ khác nhau.

Ảnh hưởng của pepton, triptone, bột nấm men lên quá trình sinh trưởng và phát triển của chồi lan hài hồng nuôi cấy in vitro

Kết quả thu được trình bày trong bảng 2 và hình 1B cho thấy, ở các nồng độ thích hợp của peptone, triptone và bột nấm men có tác động kích thích sự hình thành chồi, lá và làm gia tăng chiều cao cây cũng như tỷ lệ sống của mẫu cấy. Tuy nhiên, ở mỗi nồng độ khác nhau của

Điều này được giải thích bởi trong các dịch chiết này có chứa các chất có lợi cho sự sinh trưởng phát triển của cây như các amino acid, các loại vitamin, đường và các chất kích thích sinh trưởng (nhóm cytokinin) [9], cũng như các chất khoáng vô cơ như photpho, magiê, kali và natri [15].
peptone, triptone và bột nấm men cũng có sự tác động khác nhau đến các chỉ tiêu sinh trưởng như số lá, số chồi, tỷ lệ sống của mẫu cấy. Số lượng chồi hình thành nhiều nhất (3,9 chồi/mẫu cấy) khi bổ sung 1 mg/l bột nấm men, tuy nhiên, tỷ lệ sống chỉ đạt (77,7%), trong khi đó bổ sung 2 mg/l peptone hoặc 1 mg/l triptone, tỷ lệ sống của mẫu cấy đạt 100%, nhưng số lượng chồi chỉ đạt 2,9 chồi/mẫu cấy. Việc bổ sung các hợp chất hữu cơ vào môi trường nuôi cấy đã làm gia tăng số lượng và chiều cao chồi lan hài theo nghiên cứu của Chyuam et al. (2010) [2] và Songjin et al. (2012) [17]. Kết quả này do các hợp chất có chứa các nitơ hữu cơ giúp cây dễ hấp thu hơn các nitơ vô cơ tạo cho cây sinh trưởng và phát triển tốt [2].

Bảng 1. Ảnh hưởng của chuối, nước dừa, khoai tây lên quá trình sinh trưởng và phát triển của chồi lan hài hồng nuôi cấy in vitro

Công thức Số lá/mẫu cấy Số chồi/mẫu cấy Chiều cao chồi (mm) Tỷ lệ sống (%)
Đối chứng 3,8 dez 2,3 cd 13,4 e 59,2 f
10 g/l chuối 4,5 bc 3,1 b 20,2 a 74,0 cde
20 g/l chuối 5,6 a 3,8 a 19,0 ab 81,4 abc
30 g/l chuối 4,9 b 0,9 f 17,1 abcd 70,3 de
10 g/l khoai tây 3,4 e 2,8 bc 14,4 de 85,1 ab
20 g/l khoai tây 4,3 c 1,5 e 15,4 cde 88,8 a
30 g/l khoai tây 4,0 cd 1,2 ef 17,5 abcd 66,6 ef
100 ml/l nước dừa 3,7 de 2,3 d 17,3 abcd 59,2 f
200 ml/l nước dừa 4,8 b 3,2 b 17,8 abc 74,0 cde
300 ml/l nước dừa 4,0 cd 1,3 ef 16,3 bcde 77,7 bcd
ANOVAy

A

CV

 

*

6,19%

 

*

15,42%

 

*

9,93%

 

*

16,59%

y*. có ý nghĩa ở mức p ≤ 0,05; z. trong mỗi cột các giá trị với chữ cái giống nhau, sự khác biệt giữa các công thức không có ý nghĩa bởi sự phân hạng của Duncan’s Mutiple Range Test.

Bảng 2. Ảnh hưởng của peptone, triptone, bột nấm men lên quá trình sinh trưởng và phát triển của chồi lan hài hồng nuôi cấy in vitro

Công thức Số lá/ mẫu cấy Số chồi/ mẫu cấy Chiều cao chồi (mm) Tỷ lệ sống (%)
Đối chứng 3,8 dz 2,4 b 13,7 d 59,2 def
1g/l peptone 3,7 d 1,1 c 16,0 bc 62,9 cde
2g/l peptone 4,7 ab 2,9 b 18,7 a 100 a
3g/l peptone 3,7 d 1,2 c 13,7 d 48,1 fg
1g/l triptone 4,0 cd 2,9 b 15,4 cd 100 a
2g/l triptone 4,3 bc 1,3 c 15,4 cd 74,0 bc
3g/l triptone 3,9 d 1,1 c 16,5 bc 44,4 g
1g/l bột nấm men 3,9 d 3,9 a 15,5 cd 77,7 b
2g/l bột nấm men 3,7 d 2,6 b 16,5 bc 70,3 bcd
3g/l bột nấm men 4,8 a 1,6 c 17,7 ab 53,3 efg
ANOVAy

A

CV

 

*

5,44%

 

*

13,95%

 

*

6,10%

 

*

13,51%

Chú thích: như bảng 1.

Bảng 3. Ảnh hưởng của tảo spirulina lên quá trình sinh trưởng và phát triển của chồi lan hài hồng nuôi cấy in vitro

Nồng độ tảo (mg/l) Số lá/mẫu cấy Số chồi/ mẫu cấy Chiều cao cây (mm) Tỷ lệ sống (%)
0 3,8 bz 2,3 c 13,5 b 59,2 b
10 4,5 b 2,3 c 16,3 b 100,0 a
30 5,5 a 3,1 b 20,3 a 100,0 a
50 5,5 a 4,0 a 23,0 a 100,0 a
70 4,0 b 3,0 b 15,2 b 100,0 a
ANOVAy

A

CV

 

*

6,11%

 

*

11,37%

 

*

7,65%

 

*

0,00%

Chú thích: như bảng 1.

Ảnh hưởng của tảo spirulina lên quá trình sinh trưởng và phát triền của chồi lan hài hồng nuôi cấy in vitro

Kết quả của chúng tôi cho thấy, bổ sung của tảo spirulina có tác động tốt đến sự sinh trưởng và phát triển của chồi lan hài hồng in vitro (bảng 3, hình 1c). Khi tăng nồng độ tảo spirulina, các chỉ tiêu theo dõi như số lá, số chồi, chiều cao chồi và tỷ lệ sống của mẫu cấy cũng tăng theo tương ứng và đạt tốt nhất khi bổ sung 50 mg/l bột tảo. Nếu tiếp tục gia tăng nồng độ tảo cao hơn 50 mg/l, các chỉ tiêu tăng trưởng trên bắt đầu giảm. Thông thường, phương pháp gây tổn thương chồi làm tăng số lượng chồi nhưng cũng là nguyên nhân làm mẫu cấy bị chết [7]. Bột tảo spirulina làm gia tăng tỷ lệ sống của mẫu cấy và đạt 100%, đây là chỉ tiêu sinh trưởng rất quan trọng trong giai đoạn nhân chồi cây lan hài hồng. Điều này có thể giải thích, trong thành phần của tảo có chứa nhiều amino acid tự do, các loại vitamin như vitamin A, vitamin B và vitamin E làm gia tăng quá trình trao đổi chất, chống hóa nâu của mẫu cấy, giúp mẫu cấy hấp thụ dưỡng chất tốt hơn làm cho mẫu cấy sinh trưởng và phát triển mạnh làm gia tăng tỷ lệ sống [1, 3, 5, 8, 11].

KẾT LUẬN

Môi trường thích hợp cho nhân chồi lan hài hồng trong 3 loại hợp chất hữu cơ là môi trường MS có bổ sung 0,5 mg/l TDZ, 8 g/l agar, 20 g/l đường và 20 g/l chuối hoặc 1 g/l bột nấm men. Bổ sung nồng độ tảo spirulina ở nồng độ 50 mg/l vào môi trường nhân chồi làm gia tăng số lượng chồi và tỷ lệ sống của mẫu cấy.
TÀI LIỆU THAM KHẢO
1. Aiba S., Ogawa T.,1997. Assessment of growth yield of a blue-green algae: Spirulina plantensis, in axenic and continuous culture. J. Gen. Microbiol., 10: 179-182.
2. Chyuam Y. N., Norihan M. S., Faridah Q. Z., 2010. In vitro multiplication of the rare and endangered slipper orchid, Paphiopedilum rothschildianum
(Orchidaceae). Af. J. Biotech., 9(14): 20622068.
3. Dal B., Gerencsér Zs., Szendrő Zs., Mugnai C., Cullere M., Ruggeri S., Mattioli S., Castellini C., Dalle Zotte A., 2014. Effect of dietary supplementation of Spirulina (Arthrospira platensis) and Thyme (Thymus vulgaris) on rabbit meat appearance, oxidative stability and fatty acid profile during retail display. Meat Sci., 96 (1): 114-119.
4. Dennis P. S., Peter D. A., 1981. In vitro germination of Paphiopedilum seed of a completely defined medium. Sci. Hortic., 14: 165-170.
5. Dillon J. C., Phuc A. P., Dubackq J. P., 1995. Nutritional value of the alga Spirulina. World Rev. Nutr. and Diet., 77: 32-46.
6. Duong T. N., Dang T. T. T., Nguyen T. D., Vu Q. L., Nguyen T. H., Kiem T. T. V., Chendanda C. C., 2007. In vitro sterm elongation of Paphiopedilum delenatii guillaumin and shoot regeneration viva sterm node culture. Propag. Ornam. Plants, 7(1): 29-36.
7. Duong T. N., Phan T. T. T., Nguyen H. V., Dang T. T. T., Dinh V. K., Nguyen V. B., K. Tran T. V., 2005. A wounding method and liquid culture in Paphiopedilum delenatii propagation. Propag. Ornam. Plants, 5(3): 156-161.
8. Henrickson R., 1989. Earth food Spirulina. Laguna Beach, Califonia, Ronore
Enterprises Inc, 23-42.
9. Laurain D., Chenieux J., TremouillauxGuiller C. J., 1993. Direct embryogenesis from female haploid protoplasts of Ginkgo balboa L., a medicinal woody species. Plant Cell Rep., 12: 656-660.
10. Li C. H., Chi J. L., Ching I. K., Bau, L.H., Toshi M., 2001. Paphiopedilum cloning in vitro. Sci. Hortic., 91: 111-121.
11. Naif A. A., 2013. Heavy metal analysis in commercial Spirulina products for human consumption. Saudi J. Biol. Sci., 20 (4): 383-388.
12. Patcharawadee W., Eric B., Kongkanda C., Sureeya T., 2011. Effect of cytokinins (BAP and TDZ) and auxin (2, 4-D) on growth and development of Paphiopedilum callosum. Nat. Sci., 45: 12-19.
13. Pierik R. L. M., Sprenkels P. A., Harst B. V. D., Meys Q. G. V. D., 1988. Seed germination and further development of plantlets of Paphiopedilum ciliolare Pfitz. In Vitro Sci. Hortic., 34: 139-153.
14. Pou I. H., Jen T. C., Wei C. C., 2008. Plant regeneration via protocorm-like body formation and shoot multiplication from seed-derived callus of a maudiae type slipper orchid. Acta Physiol Plants, 30(5): 755-759.
15. Raghavan V., 1977. Diets and culture media for plant embryos. In: Rechcigl, M.J.(ed.), CRC handbook series in nutrition and food. Taylor Francis Publisher, London, pp. 361413.
16. Songjun Z., Jia W., Kunlin W., Jaime A. T. S., Jianxia Z., Jun D., 2013. In vitro propagation of Paphiopedilum hangianum Perner & Gruss. Sci. Hortic., 15: 147-156.
17. Songjun Z., Kunlin W., Jaime A. T. S., Jianxia Z., Zhilin C., Nianhe X., Jun D., 2012. Asymbiotic seed germination, seedling development and reintroduction of
Paphiopedilum wardii Sumerh, an endangered terrestrial orchid. Sci. Hortic., 138: 198-209.
18. Ting Y. C., Jen T. C., Wei C. C., 2004. Plant regeneration through direct shoot bud formation from leaf cultures of Paphiopedilum orchids. Plant Cell Tiss. Org. Cult., 76:11-15.
19. Yu J. L., Yu C. T., Yung W. S., Ruey S. L., Fang S. W., 2011. In vitro shoot induction and plant regeneration from flower buds in Paphiopedilum orchids. In Vitro Cell. Dev. Biol. Plants, 47: 702-709.
20. Yung H. L., Chen C., Wei C. C., 2000. Plant regeneration from callus culture of a Paphiopedilum hybrid. Plant Cell Tiss. Org. Cult., 62: 21-25.

Nguồn tham khảo: Nguyễn Thị Cúc, Nguyễn Văn Kết, Dương Tấn Nhựt, Nguyễn Thị Kim Lý.  NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ HỢP CHẤT HỮU CƠ LÊN QUÁ TRÌNH SINH TRƯỞNG VÀ PHÁT TRIỂN CÂY LAN HÀI HỒNG (Paphiopedilum delenatii) IN VITRO .Tạp chí sinh học 2014, 26(1se): 250-256

Facebook Comments