Nhân giống Lan Hồ Điệp in vitro- bổ sung các chất tự nhiên

Tham khảo quy trình nhân giống lan Hồ điệp Phalaenopsis từ phát hoa hay còn gọi là ngồng hoa, không thông qua giai đoạn mô sẹo.Và một phương pháp nữa đó là bằng cách gieo hạt. Trong bài viết sẽ giới thiệu bổ sung thêm một số chất tự nhiên cho môi trường nuôi cấy.\

1. Khởi tạo mẫu bằng phát hoa

Vào mẫu từ phát hoa: Phát hoa còn non (chưa nở hoa) có chứa mắt ngủ được lấy để vào mẫu. Rửa sạch mẫu dưới vòi nước chảy, dùng dao sắc cắt mẫu thành từng đoạn, mỗi đoạn chứa 1 mắt ngủ. Tráng lại bằng nước cất rồi đưa vào khử trùng ở tủ cấy cấy vô trùng.

Phát hoa được cắt thành từng đốt có chứa mắt ngủ

Tiến hành khử trùng mẫu lần 1 bằng dung dịch HgCl2 0,1% trong thời gian 5 phút, tráng lại 4-5 lần bằng nước cất vô trùng, bóc bỏ phần lá bao bên ngoài để lộ ra mắt ngủ rồi khử trùng tiếp lần 2 cũng bằng dung dịch HgCl2 0,1% trong thời gian 1 phút.

Rửa sạch mẫu, cắt bỏ phần mẫu bị tổn thương do hoá chất khử trùng gây rồi dùng pence cấy các mẫu vào môi trường đã chuẩn bị sẵn, mỗi mẫu 1 bình.

Môi trường vào mẫu: Vacin Went+ 100 ml Nước Dừa + 10g Đường + 2mg/lBA +0,3 mg/l Kinetin

2. Khởi tạo mẫu bằng cách gieo hạt

Chọn trái còn xanh sau đó tiến hành khử trùng. Phương pháp khử trùng bằng hạt khá đơn giản so với bằng phát hoa.

Trái lan sau khi được rạch ra để lấy hạt

Lấy trái Lan rửa dưới vòi nước chảy trong 5 phút để rửa sạch hết các chất dơ. Sau đó tiến hành rửa lại bằng nước cất tiệt trùng 3 lần. Tiếp theo ngâm trong cồn 90o và đốt, hơ trên ngọn lửa đèn cồn. Sau đó dùng dao rạch trái để lấy hạt cho vào bình nghiệm.

Hạt gieo sau 5-7 ngày bắt đầu nảy mầm, sau 20 ngày bắt đầu hình thành thể tiền chồi (PLBs: Protocorm Like Bodies). Sau 1,5 tháng được cấy chuyển sang môi trường nhân nhanh:

Vacin Went + 100ml/l Nước dừa+ 10g/l Đường + 30g/l Khoai tây+ 30g/l Cà rốt +1g/l peptone
+ 0,3 g/l Than hoạt tính + 6,5 g/l agar

Cứ 2 tháng ta cấy chuyền định kỳ một lần. Sau 4-5 vòng cấy chuyển trên môi trường nhân nhanh sẽ tạo thành cây hoàn chỉnh với 4-5 lá, trọng lượng cây ≥3 gram đủ tiêu chuẩn ra ngôi trồng ngoài vườn ươm.

3. Giai đoạn nhân nhanh

Nguyên liệu để cắt lớp mỏng là thể Protocorm hoặc chồi non mới được hình thành hoặc mới qua một lần cấy chuyển cấy. Có thể cắt lát mỏng để cấy chuyền, chiều dày lát mỏng là 0,3-0,5cm. Môi trường nuôi cấy lát mỏng:

Vacin Went + 100mlND + 0,5mm 2,4D + 0,3mg Kinetin + 10g đường Saccarose + 6,5g agar/lít

Sau khi nuôi cấy được khoảng 30 ngày các mẫu cấy sẽ bắt đầu phát sinh hình thái hình thành nên các PLBs. Sau khi PLBs hình thành, tiến hành cấy chuyển các PLBs sang môi trường nhân nhanh để chúng tiếp tục phát sinh hình thái tạo thành cây hoàn chỉnh

Trong quá trình nuôi cấy, bổ sung 1g PVP (polyvinyl pirollidon)/lít môi trường để ngăn ngừa hiện tượng hoá đen môi trường. Số vòng cấy chuyển là 4-5 lần, sau đó phải vào mẫu mới để thay thế.
Loại bình cấy thích hợp sử dụng trong nuôi cây in vitro là bình trụ thủy tinh miệng rộng 110. Nút đậy bình là nút cao su có màng trao đổi khí.

Lưu ý trong phòng nuôi cấy in vitro:

  1. Nhiệt độ: 25± 20C
  2. Ánh sáng: 2.500-3.000 lux
  3. Quang chu kỳ: 12-14 giờ chiếu sáng/24 giờ

Đem ra vườn 

Tiêu chuẩn cho phép để đưa cây in vitro ra khỏi bình nghiệm là có đủ thân lá rễ, không bị nấm khuẩn, có trọng lượng tươi >5g cây

Cần tập cho cây in vitro thích nghi với môi trường bên ngoài trước khi đem ra bình nuôi cấy; bằng cách mở nút bình từ 90-120 phút vào buổi sáng, trong điều kiện của vườn ươm.

Cây con lấy ra bình được ngâm và rửa sạch, xử lý thuốc diệt nấm Ridomil  (nồng độ 3 g/lít) trong khoảng 3 phút

Giá thể là rêu khô (dớn) dược xử lý bằng chế phẩm EM, nồng độ 1ml/lít nước ngâm 30 phút, sau đó vắt sạch.

Trồng cây vào giá thể trong bầu có đường kính 5 cm lưu ý quấn giá thể quanh gốc cây đảm bảo chặt và sau đó đưa cây vào bầu.

Đặt cây trên khay, loại khay có 4 rãnh, chiều ngang rãnh 5 cm

Che lưới đen cho cây đảm bảo cường độ ánh sáng 3000 – 4000lux

Nhiệt độ: 25 – 31 oC, ẩm độ không khí 65-85%

Tưới nước và dinh dưỡng: Trong 15 ngày đầu chỉ tưới nước, phun nhẹ trên lá bằng vòi phun tay, giữ ẩm cho giá thể. Sau 15 ngày, phun cho cây bằng chế phẩm Vitamin B1, nồng độ 50ml/100 lít, định kỳ phun 7 ngày/lần. Sau khi cây được 1 tháng, tưới cho cây bằng phân NPK với tỷ lệ 30:20:10 với nồng độ 40g/100 lít nước, định kỳ tưới 7 ngày/lần.

Những ngày không phun, tưới dinh dưỡng phải chú ý giữ ẩm cho cây, thông thường 2-3 ngày tưới 1 lần bằng vòi phun tay.

Sau 6 tháng thì có thể sang bầu 8,3 cm.

Có thể bạn quan tâm:

  1. Nhân giống in vitro Lan Hồ Điệp (chi Phalaenopsis) thông qua nuôi cấy mắt ngủ được cảm ứng bằng cyto
  2. Nuôi cấy mầm ngủ phát hoa lan hồ điệp PHALAENOPSIS SP
Facebook Comments

Leave a Reply

Your email address will not be published. Required fields are marked *